REPLI-g Single Cell Kit (24)

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  • 9600
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  • 9600

  • 品牌:Qiagen/凯杰
  • 货号:150343
  • 规格:1kit
  • 计量单位:
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  • 辽宁省

    吉林省

    黑龙江省

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看了又看换一换

商品名称:REPLI-g Single Cell Kit (24)

  • 货号:150343
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Features

  • 采用多重置换扩增技术对基因组位点进行无偏差的扩增
  • 适用于二代测序等新技术应用
  • 产量稳定,可达40 µg(产物平均长度大于>10 kb)
  • 可用于癌症、干细胞或宏观基因组学(metagenomics)研究
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Product Details

很多研究人员使用二代测序仪器对生物样本的DNA序列进行分析和基因分型,但经常受限于有限的样本量。REPLI-g Single Cell Kit可均一的扩增单个细胞(1至1000个细菌或肿瘤细胞)或纯化的基因组DNA,能够覆盖基因组所有位点。另有专用于干血或新鲜或冷冻的组织样本的实验方案。所有缓冲液和试剂生产都经过严格控制的流程,避免污染DNA,确保每次实验获得可靠的结果。该产品采用多重置换扩增(MDA)技术,对所有基因组位点进行无偏差的扩增。与基于PCR的全基因组扩增技术相比,该技术具有更好的扩增高保真度,避免出现假阳性或假阴性信号。

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Performance

覆盖基因组所有位点,十分适用于二代测序和其他下游应用

REPLI-g Single Cell Kit扩增的DNA平均长度大于10 kb,并且覆盖所有基因组位点。该产品已经过验证,适用于二代测序、基于芯片技术的比较基因组杂交(aCGH)和real-time PCR应用等多种下游分析。使用该产品无需单独进行PCR扩增,减少了手动操作,获得的产物长度PCR方法更长(参见" Next-generation sequencing using REPLI-g amplified DNA requires less hands-on time and generates more sequence information than PCR-based methods")。用扩增产物进行二代测序,获得高品质结果。这表明该试剂盒的位点覆盖率大,错配率低,其扩增的DNA(甚至从单一细菌细胞中扩增的DNA)能够与纯化获得的基因组DNA相媲美(参见" Comparable NGS results")。另有研究对人类常染色体和X染色体上的多个标记物进行了分析,三个独立的实验均显示:基因组的所有位点被成功扩增,没有遗漏任何一个位点(参见" Complete genome coverage")。

表1. 样本类型和研究领域
样本类型(细胞/DNA) 研究领域
人类/动物 生物标记物研究(SNP、突变、CNV)
干细胞研究
循环胚胎细胞分析
嵌合体研究
遗传易感性研究
转基因动物基因分型
癌症 体细胞遗传变异分析
肿瘤恶化
肿瘤干细胞/进化
循环肿瘤细胞分析
细菌 宏观基因组学研究
病原体分析
微生物基因分型
Plants* 植物气孔研究
花粉分析
* 没有细胞壁的细胞或纯化的基因组DNA。

REPLI-g Single Cell Kit的表现优于其他供应商的试剂盒

其他供应商的试剂盒基于PCR技术进行全基因组扩增,获得的产物片段较短,带有PCR引物序列,可能影响下游应用。基于PCR的全基因组扩增容易出现错误,会导致碱基对突变、STR的减少或增多,使用低保真Taq DNA聚合酶会导致位点缺失。相反,REPLI-g Single Cell Kit能够进行高度均一的全基因组扩增,位点偏差小。对四个试剂盒进行了检测,其中两个利用多重置换扩增技术(包括REPLI-g Single Cell Kit),另外两个利用PCR技术。采用单一细胞扩增实验方案对所有试剂盒进行序列位点检测。除REPLI-g Single Cell Kit外的其他供应商的试剂盒都出现了位点的遗漏(参见" Unbiased DNA amplification from a single cell")。

See figures
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Principle

REPLI-g Single Cell Kit含有REPLI-g sc Polymerase,这是一种优化的新型高保真Phi 29聚合酶。该试剂盒采用多重置换扩增技术扩增复杂的基因组DNA,温和的碱孵育能够避免DNA片段化,促进对所有位点的无偏差扩增。该试剂盒十分适用于分离的肿瘤细胞或细菌细胞等单一细胞,能够扩增获得高产量DNA(参见表1)。此外,该试剂盒还配有专用于鲜血或干血、新鲜或冷冻组织的实验方案,可用于多种研究样本。常规DNA产量可达40 µg,对模板的起始量要求低,因此进行后续遗传分析时无需检测DNA浓度。REPLI-g Single Cell Kit的扩增产物平均长度超过10 kb,且覆盖所有位点,适合于多种应用,包括二代测序、基于芯片技术的比较基因组杂交、焦磷酸测序和real-time PCR分析(参见表2)。

表2. 下游应用和仪器
应用 仪器
全基因组测序 二代测序平台
外显子组测序
SNP基因分型芯片 芯片平台
Array CGH
qPCR/PCR技术 Real-time PCR/PCR仪
Sanger测序 毛细管测序仪
焦磷酸测序 PyroMark (QIAGEN)
多家供应商均有销售

扩增原理

REPLI-g Single Cell Kit采用等温基因组扩增技术,即多重置换扩增(MDA)。六聚体与变性DNA随机结合,然后在等温条件下,在优化的Phi 29聚合酶作用下,发生链置换合成反应。每个置换后的单链作为模板,与引物结合,可扩增获得高产量DNA(参见" Multiple Displacement Amplification (MDA) technology")。Phi 29聚合酶为噬菌体衍生酶,具有3'→5'引物外切酶活性(校正活性),其保真性是Taq DNA聚合酶的1000倍。Phi 29聚合酶在优化的REPLI-g Single Cell缓冲液体系中,能够轻松的打开发卡结构等二级结构,因此可促进扩增时聚合酶正常工作。可扩增获得长达100 kb的DNA片段(参见" Unbiased amplification with Phi 29 polymerase")。

细胞裂解和DNA的碱变性 

基因组DNA在用于酶促扩增反应前必须经过变性,而这一变性过程通常使用高温或高pH值(强碱)孵育。REPLI-g Single Cell Kit采用温和的碱孵育,在细胞裂解、DNA变性的同时,确保DNA片段化程度小,不产生碱基突变。因此扩增获得的DNA完整度高,产物长度长,覆盖位点多(参见" Effect of heat and alkaline denaturation on loci representation")。

高效去除可检测到的DNA污染

REPLI-g Single Cell Kit中的所有组分都经过了独特的去污染流程,避免扩增产物被污染。在标准化流程中,对缓冲液和试剂进行紫外线照射,确保其不会污染DNA(参见" Innovative decontamination procedure")。紫外线照射后,对试剂盒的所有组分进行严格的质量控制,确保其性能。

销售区域
  • 辽宁省
  • 吉林省
  • 黑龙江省