商品名称:QuantiTect Rev.Transcription Kit (50)
QuantiTect Reverse Transcription Kit通过方便快速的操作过程进行cDNA合成,并有效去除基因组DNA。应用gDNA Wipeout Buffer可高效去除RNA样本中的基因组DNA污染。QuantiTect Reverse Transcription Kit提供所有快速、高效逆转录所需的组分,包括Quantiscript Reverse Transcriptase、Quantiscript RT Buffer和独特的RT Primer Mix。合成的cDNA经过优化可用于real-time PCR,实现对mRNA转录本所有区域的靶分子进行可靠的定量检测。
使用QuantiTect Reverse Transcription Kit,基因组DNA污染物可使用独特的gDNA Wipeout Buffer迅速有效的去除(参见" Effective genomic DNA removal for accurate real-time RT-PCR")。去除基因组DNA对于准确的基因表达结果非常重要,而并不总是可以设计RNA特异性引物或探针。使用gDNA Wipeout Buffer可节省时间和费用,因为纯化RNA样品过程中或纯化后均无需另外采用DNase消化。
Quantiscript Reverse Transcriptase的高RNA亲和性配合Quantiscript RT Buffer可从各种RNA模板中获得高产量cDNA(见表“低丰度转录本可获得较高产量的cDNA”)。即使复杂的模板也能成功逆转录,如GC含量高或有复杂二级结构的模板。
IL12A的CT值 (低表达) | IL1RN的CT值 (高表达) | |||
Input RNA (ng) | QIAGEN | Supplier AII | QIAGEN | Supplier AII |
---|---|---|---|---|
1000 | 30.9 | 32.0 | 23.1 | 24.9 |
100 | 34.2 | 35.4 | 26.3 | 26.6 |
10 | 37.8 | 46.8 | 29.7 | 30.3 |
1 | N.D. | N.D. | 32.4 | 34.5 |
RT Primer Mix包含有特别优化的oligo-dT和随机引物的混合物,使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始,甚至可从5'区域开始(参见"Sensitive detection of a target at the 5' region of a 12.5 kb transcript.
QuantiTect Reverse Transcriptase是Omniscript和Sensiscript Reverse Transcriptases的新型混合物,对RNA具有高亲和性,可从各种含量的RNA(10 pg到1 µg)合成cDNA。与其他供应商提供的试剂盒相比,QuantiTect Reverse Transcription Kit为real-time PCR分析提供高产量的cDNA,无需考虑待扩增目标序列位于转录本的哪个区域。即使复杂的模板也能成功逆转录,如GC含量高或有复杂二级结构的模板。QuantiTect RT Buffer已经过优化,可与real-time PCR缓冲液兼容。
为获得准确的real-time RT-PCR基因表达分析结果,很重要的是仅扩增和检测cDNA。基因组DNA的干扰可通过设计横跨外显子/外显子边界的引物或探针避免。尽管如此,在某些特殊情况下(如:cDNA来自一个单外显子基因),起始RNA样品必须无基因组DNA。使用QuantiTect Reverse Transcription Kit,基因组DNA污染物可使用独特的gDNA Wipeout Buffer迅速有效的去除。使用gDNA Wipeout Buffer可节省时间和费用,因为纯化RNA样品过程中或纯化后均无需另外采用DNase消化。另外,不需要设计RNA特异性引物或探针。
组份 | 优势 |
---|---|
gDNA Wipeout Buffer | 在real-time RT-PCR时仅检测RNA |
Quantiscript Reverse Transcriptase | 适用的RNA起始量范围大(10 pg到1 µg RNA) 灵敏度高 |
Quantiscript RT Buffer | 处理复杂模板 |
RT Primer Mix | 对转录本的各个区域,包括5'区进行cDNA合成 |
使用QuantiTect Reverse Transcription Kit可在20分钟内去除基因组DNA和合成cDNA(参见" Fast and convenient cDNA synthesis")。由于两个反应均在同一孵育温度并使用预混液构建反应,因此操作过程快速且方便。
QuantiTect Reverse Transcription Kit包括快速合成cDNA所需的所有组分。纯化的RNA只需简单地与gDNA Wipeout Buffer孵育,即可有效去除污染的基因组DNA。与其他的方法相比,使用Quantiscript Reverse Transcriptase、Quantiscript RT Buffer和RT Primer Mix制备的预混液可将RNA样品直接进行逆转录。使用Quantiscript Reverse Transcriptase,即使具有复杂的二级结构的RNA也可在低温下转录,确保RNA保持完整:整个反应都在42°C下完成,并在95°C失活。不需要RNA变性、引物退火和RNase H消化。