商品名称:QIAseq Library Quant Assay Kit
准确定量文库对于NGS平台的高效使用十分重要。但是,当前的分光广度法只能检测总核酸浓度。GeneRead Library Quant System则采用real-time PCR技术,仅定量检测两端有接头的DNA分子。只有两端有接头的DNA分子才能在乳液PCR(Ion Torrent)或桥式PCR(Illumina)中得到扩增,因此此方法能够准确定量检测可扩增的文库DNA。real-time PCR灵敏性高,能够定量检测低浓度文库,甚至是浓度低于传统分光光度法的检测阈限。
GeneRead Library Quant System提供管装和芯片规格,经过优化,适合配合GeneRead qPCR SYBR Green Mastermixes使用,具有出色的灵敏性和宽泛的动态范围。两种规格都提供适合Illumina或Ion Torrent平台的DNA标准品。芯片规格提供分装的5个浓度的10倍梯度稀释标准品,混合有PCR引物,一式三份。确保您的样本文库在检测范围之中(参见 Principle of GeneRead Library Quant System)。
芯片工作流程(参见 GeneRead Library Quant Array workflow)使用两个10倍稀释的样本文库,确保其浓度在梯度稀释的DNA标准品检测范围内。将样本与Generead qPCR SYBR Green Mastermix混合,等分为三份,加入芯片中。进行PCR,将原始CT数据导出至提供的数据分析Excel文件中,进行文库浓度的自动计算(Illumina)或模板稀释因子计算(Ion Torrent/Proton)。
管装标准品的工作流程与芯片的工作流程相似,仅有少数不同。先制备5个10倍梯度稀释的DNA标准品,以及2个10倍梯度稀释的样本文库。这样可确保文库的浓度在标准品稀释液范围之内。下一步,将稀释的DNA标准品和样本文库与提供能够的PCR试剂和相应的GeneRead qPCR SYBR Green Mastermix混合。进行PCR,将原始CT数据导出至提供的数据分析Excel文件中,进行文库浓度的自动计算(Illumina)或模板稀释因子计算(Ion Torrent/Proton)。