商品名称:QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit (100)
QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit基于QIAGEN专有的PCR技术确保了在首次尝试即可得到成功的PCR。预优化的混合液包括HotStarTaq Plus DNA Polymerase和新型的PCR缓冲液体系,专为多重PCR研发。由HotStarTaq Plus DNA Polymerase提供的严格热启动机制和该缓冲液独特的成分,通过防止非特异性退火引物和引物二聚体,提高多重反应的特异性。
QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit由于其他经测试的供应商的试剂盒,并在多重PCR应用中确保高特异性和灵敏度,无需优化PCR参数(参见" Efficient 19-plex PCR"和" Successful 16-plex PCR over a wide range of template amounts")。该试剂盒还包含新型的辅助剂Q-Solution,用于扩增高GC含量的模板,优化欠佳的PCR。
QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit可成功应用于广泛的高级应用(参见下表)。该试剂盒提供的简单的反应设置、快速的操作流程和简易的操作提供快速可靠的结果,无需PCR参数优化。多重检测研发简单易行,能够在常规研究中有效节省时间和成本。
DNA或cDNA源 | 应用 |
---|---|
植物、动物/人类 | 卫星DNA分析(比如,STR或VNTR分析) 转基因植物/动物的分型 谱系分析(比如,农场动物) GMO分析 病原体的检测 食物分析 性别检测 突变检测 SNP位点扩增 定性和半定量 基因分析 剪接异构体鉴定 |
细菌/病毒 | 卫生分析 病原体检测 微生物基因分型 |
环境样本 | 宏基因组研究 |
其他 | 汇集单一检测(节省时间和成本) 靶位富集用于高通量测序古代DNA 基因表达研究 |
浓度:5单位/µl
重组酶:有
底物类似物:dNTP、ddNTP、dUTP、biotin-11-dUTP、DIG-11-dUTP、荧光-dNTP/ddNTP
延伸率:72°C下2–4 kb/分钟
半衰期:97°C下10分钟;94°C下60分钟
扩增效率:≥105倍
5'–>3'外切酶活性:有
Extra A辅助剂: 有
3'–>5'外切酶活性:无
污染核酸:无
污染RNA酶:无
污染蛋白酶:无
自吸泵活性:无
QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit基于QIAGEN专有的多重PCR技术,含有即用型混合液。该试剂盒所有的成分专为提供最易操作和最大速度研发,提供一致可靠的结果(参见下表)。Multiplex PCR Master Mix包含优化的HotStarTaq Plus DNA Polymerase和MgCl2浓度,以及dNTP和新型的PCR缓冲液。
Multiplex PCR为研究者节省时间和成本用于进行大量的PCR反应,广泛应用于基因分型以及在研究、法医和分子检测实验室的DNA或cDNA检测应用。应用范围包括分型和转基因生物和病原体的分析、微卫星的扩增分析、检测SNP突变区域,以及宏基因组学研究。然而,多重PCR技术要求严格。PCR优化是多重PCR成功与否的关键因素。多重PCR中不同引物对不同杂交动力学可能导致如下问题,如扩增偏向性。能高效率结合的引物,更多地利用扩增反应元件,从而降低了其他PCR产物的产量。由于更大的引物量,因此存在更大的形成引物二聚体和非特异性启动的风险。不解决这些风险导致低灵敏度、非特异性扩增和选择靶位的偏向性扩增,因此得到不一致的不令人满意的结果。共格这些瓶颈需要繁琐耗时的优化步骤,导致成本的增加。QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit消除了这些风险,在首次尝试时就运行顺利。Multiplex PCR Master Mix独特的组成确保了高特异性和灵敏度的扩增反应,甚至是难扩增的靶位。该试剂盒能快速成功地建立所有多重PCR检测,有效的节省时间和成本(参见" Successful multiplex PCR without the need for optimization")。
HotStarTaq Plus DNA Polymerase是Taq DNA聚合酶的优化形式,在室温下无聚合酶活性。这能防止在PCR设置和PCR初始循环过程中,低温下非特异性退货引物的延伸和引物二聚体的形成。无需优化反应条件。在室温下可方便设置多重检测。HotStarTaq DNA Polymerase在95°C下孵育5分钟激活,可整合入现有的各种热循环程序中。
这特殊的缓冲液包含优化的混合物由K+和NH4+以及独特的PCR辅助剂、MP因子组成可增加模板引物的局部浓度(参见" Stable and efficient annealing")。将非特异性退火最小化并成功地平行扩增所有靶位,甚至只有非常少量的模板。配合K+和其他阳离子、MP因子稳定特异性结合的引物,并能够用HotStarTaq Plus DNA Polymerase进行高效的引物延伸。通过在每个PCR循环中高比率的特异性-非特异性引物结合,该新型的缓冲液维持每个PCR循环的特异性扩增。由于KCl和(NH4)2SO4独特的平衡结合,相比传统的PCR缓冲液,该缓冲液能在更广泛的退火温度和Mg2+浓度下,提供严格的引物退火条件。通过改变退火温度或Mg2+浓度可优化PCR,因此通常将优化过程最小化或无需要优化。
该试剂盒包含独特的辅助剂Q-Solution,促进难扩增的靶位扩增如富含GC的区域或具有复杂二级结构的模板。该试剂盒还含有高度灵活的CoralLoad Dye,通过提高移液器的可视性和后续的凝胶上样以及DNA迁移的可视性,来进一步提高操作的方便性(参见" Easy PCR setup and convenient DNA visualization")。
试剂盒组分 | 优点 |
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HotStarTaq Plus DNA Polymerase | 高特异性和灵敏度扩增 室温设置 5分钟激活时间 |
Multiplex PCR Plus Buffer with Factor MP | 平行扩增所有靶位 无需优化PCR参数 单一的用于所有多重检测的实验方案 快速的操作流程 |
CoralLoad Dye | 移液过程中简单的可视化 可即可凝胶上样 DNA迁移的可视化 |
Q-Solution | 扩增困难靶位 |
QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit能够在首次尝试就可成功进行多重PCR。
QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit使用多种方法得到的多重PCR产物的下游分析简单快速。无论分析是否使用琼脂糖凝胶电泳,毛细管电泳或是否使用QIAxcel Advanced System,所有阳离子可方便的可视化,单独的片段也可有效区别。
QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit提供更方便的即用型预优化混合液。使用混合物节省时间、简化反应设置操作,并通过消除众多移液失误和污染的可能性来增加可靠性,将移液步骤最小化并去除繁琐的计算。只需将引物和模板加入来制备最终扩增混合物。混合液可在2–8°C下储存,可更快速的设置多重PCR检测。可在室温下设置反应,操作简便,易于使用。HotStarTaq Plus DNA Polymerase在95°C经5分钟孵育激活,可整合入现有的热循环程序中。试剂盒中包含的CoralLoad Dye便于使用,提高PCR设置中移液的可视化和凝胶上DNA迁移的可视化。