C-Terminus pQE Vector Set

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  • 品牌:Qiagen/凯杰
  • 货号:32903
  • 规格:1kit
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看了又看换一换

商品名称:C-Terminus pQE Vector Set

  • 货号:32903
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Features

  • 表达C端带有6xHis标签的蛋白,确保纯化得到全长蛋白
  • pQE-16载体表达低表达蛋白,如DHFR融合蛋白
  • pQE-16载体表达短肽链蛋白,如DHFR融合蛋白
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Product Details

此系统含有3个载体(pQE-16、pQE-60和pQE-70),用于表达C端带有6xHis标签的蛋白,推荐用于开放阅读框含有“暂停位点”的蛋白,这可能导致成熟前终止。pQE-60和pQE-70使编码序列的原始起始密码子代替pQE载体的ATG,保护真实的蛋白N端。在构建两个载体时,通过PCR或突变在插入片段的ATG密码子处分别导入NcoISphI限制性位点。pQE-16可表达C端带有6xHis标签的DHFR融合蛋白。DHFR(二氢叶酸还原酶)可提高抗原性和稳定性,推荐用于低表达蛋白或易水解的短肽。由于DHFR自身在小鼠和兔中几乎没有免疫原性,DHFR融合蛋白非常适合表位筛选。
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Principle

QIAexpress pQE载体含有一个强大的噬菌体T5启动子(被E. coli RNA聚合酶识别),并含有两个lac操纵子遏制模块,用于在E. coli中严谨调控、高水平表达融合蛋白(参见" QIAexpress pQE vector")。在高水平lac遏制子存在的情况下,蛋白合成被有效断,细胞毒素载体的稳定性增强。 pQE vectors可在重组蛋白的N端或C端带上6xHis标签。

QIAexpress pQE载体的元件
元件 描述
优化的启动子/操纵子元件 由噬菌体T5启动子和两个lac操纵子序列组成,提高lac遏制子结合的可能性,确保高效遏制T5启动子
合成核糖体结合位点RBSII 用于高效翻译
6xHis标签编码序列 在多克隆区域的5'或3'端
翻译终止密码 在所有阅读框都含有,方便构建表达载体
两个强大的翻译终止子 来自噬菌体ambda的t0和来自E. coli操纵子rrnB的T1,避免通读转录,确保表达载体稳定性
ColE1复制起始位点 来自pBR322
Beta-lactamase基因(bla) 赋予氨苄青霉素抗性
See figures
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Procedure

编码目的蛋白的片段被克隆到合适的载体(详细信息可参见The QIAexpressionist Handbook)并转化至合适的E. coli表达菌株。加入IPTG诱导表达。Vector pQE-TriSystem载体可转化至E. coli,作为穿梭载体在昆虫细胞中表达重组蛋白,或转染至哺乳动物细胞。

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Applications

QIAexpress Expression系统提供高水平蛋白表达,适用于多种应用,包括:

  • 纯化功能、构象有活性的蛋白 
  • 变性条件纯化,用于抗体制备
  • 结晶,用于确定三维结构
  • 蛋白间和蛋白与DNA间相互作用分析
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