商品名称:Internal Control DNA (High conc.)
QuantiFast Pathogen +IC Kits使用序列特异性探针,可灵敏、快速的对病原体核酸进行real-time PCR或一步法RT-PCR检测。该试剂盒含有检测4个用户定义的病原体核酸(如:病毒、细菌、真菌等)所需的试剂和内参,可对阴性结果进行正确解读,提高了检测灵敏度。该试剂盒有两种规格。QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit含有RNA内参模板和内参引物/探针对,用于检测病毒RNA。QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit含有DNA内参模板和内参引物/探针对,用于检测病毒、细菌或真菌DNA。这两种试剂盒均提供分装在两个管中的不同浓度的ROX染料,因此适用于多种real-time PCR仪。为便于使用,预混液可存放在2–8°C。
QuantiFast Pathogen +IC Kits可通过多重扩增,同时检测病毒RNA或DNA、以及自带的内参(参见"Sensitive detection of Norovirus on the Rotor-Gene Q"和"High linearity and precision of singleplex and duplex detection")。实验方案专为快速PCR设计,适用于多数PCR仪,具有极高的可靠性(参见"Sensitive detection of BHV-1 on the Rotor-Gene Q"和"Sensitive detection of BHV-1 on the ABI 7500")。使用QuantiFast Pathogen +IC Kits同时扩增目标病原体和内参,提高了检测的可靠性,能够确保正确解读阴性结果(参见"Correct interpretation of negative results")。
该试剂盒提供QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer,可在稀释和反应体系构建时稳定RNA和DNA标准品,避免核酸损失。能够可靠的稀释标准品,进而用于核酸的定量检测,检测范围广,覆盖从低至高的CT值。该缓冲液能够确保标准品长期保存不降解(参见"Reliable dilution and storage of RNA standards")。
为避免假阴性结果,所有QuantiFast Pathogen +IC Kit都含有必须的试剂,可real-time检测病原体和内参。在同一反应中扩增内参和靶基因,提高了定量检测的可靠性,减少了手动操作可能产生的错误。
QuantiFast Pathogen +IC Kits可通过多重PCR灵敏、快速的进行real-time检测,或通过一步法RT-PCR检测病原体(参见"QIAGEN multiplex kits")。优化的预混液可确保PCR产物在多重扩增反应中以相同的效率和灵敏度扩增。特别研制的快速PCR缓冲液含有新型的添加剂Q-Bond,能够大幅度缩短变性、退火和延伸的时间(参见"Fast primer annealing")。浓度平衡的K+和NH4+离子、以及独特的Factor MP能够促进引物和探针与核酸模板特异性结合,确保PCR效率高(参见"Unique PCR buffer")。此外,配方独特的Sensiscript Reverse Transcriptase能确保病毒RNA的高度灵敏的逆转录,HotStarTaq Plus DNA Polymerase则提供严格的热启动,防止非特异性产物的形成。
试剂盒组分 | 特点 | 优势 | |
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5x QuantiFast Pathogen PCR Master Mix | 浓缩的预混液 | 浓度高,专为灵敏的检测病原体而设计 | 可加入的模板体积更多,增加了灵敏度 |
HotStarTaq Plus DNA Polymerase | 95ºC孵育5分钟激活 | 在室温进行qPCR反应体系构建 | |
QuantiFast Pathogen Buffer | 浓度平衡的NH4+和K+离子 | 引物探针的特异性结合确保获得可靠结果 | |
合成的Factor MP | 在单管中对至多4个基因进行多重分析 | ||
独特的Q-Bond添加物 | PCR运行时间缩短,更快获得结果,一天内可完成更多PCR反应 | ||
Internal Control Assay | Internal Control 模板 | QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit含有内参DNA模板 | 通用的DNA扩增对照能用于分析不同的病原体 |
QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit含有内参RNA | 通用的RNA扩增对照能用于分析不同的病原体 | ||
Internal Control Assay | 引物探针预混液(TaqMan探针)标记有MAX(相当于HEX、VIC等) | 不会干扰引物 | |
Additional kit components | QuantiFast Pathogen RT Mix* | 含有配方独特的Sensiscript Reverse Transcriptase | 专为灵敏检测病原体RNA而设计 |
ROX Dye Solution | 参照染料可用于Applied Biosystems 7500 real-time PCR仪的荧光信号校准。可选:可用于Stratagene仪器 | 准确定量检测需要使用ROX染料。不会干扰PCR反应 | |
High-ROX Dye Solution | 参照染料可用于Applied Biosystems 7900 PCR仪和StepOne real-time PCR仪的荧光信号校准 | ||
QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer | 缓冲液为专有配方,用于稀释和储存核酸标准品 | 在稀释和反应体系构建时稳定RNA和DNA标准品,避免核酸损失 |
QuantiFast Pathogen +IC Kits通过简单的流程,即可检测病原体和内参。试剂盒含有即用型预混液,可real-time检测病毒RNA(一步法RT-PCR)或病毒、细菌和真菌DNA(PCR)。无需优化反应条件。只需将预混液与检测试剂(引物与探针)、Internal Control Assay和Internal Control DNA或RNA 混合。也可在样本纯化步骤中加入内参,然后加入不含RNase的纯水至反应混合液。将样本DNA或RNA加入后即可开始反应,适用于各种PCR仪。试剂盒使用手册含有优化的实验方案,适用于TaqMan探针和多种PCR仪。使用手册中还推荐了可用的染料。
所有QuantiFast Pathogen +IC Kit都含有Internal Control Assay和Internal Control DNA或RNA,可直接加入反应混合液,用作扩增对照。此外,也可在纯化过程中加入内参,作为纯化和扩增的对照。如需在纯化过程中加入内参,可另外订购高浓度的Internal Control DNA或RNA (High conc.) (参见"QIAGEN Internal Control")。
QuantiFast Pathogen +IC Kits利用序列特异性探针进行灵敏的real-time PCR或一步法RT-PCR,检测病原体DNA和/或RNA,以及内参。该试剂盒适用于多种real-time PCR仪,包括QIAGEN、Applied Biosystems、Bio-Rad、Roche和Agilent的仪器。