商品名称:Certal CHO Detection Kit (100)
在生物制药中,评估最终的治疗材料确保无污染物质至关重要,如来自宿主细胞的残留DNA。Certal Residual DNA Detection Kits使用双标记水解探针(即TaqMan探针),通过real-time PCR灵敏和快速的定量残留的宿主细胞基因组DNA。Certal CHO Detection Kit包含进行双重real-time PCR的试剂,用于检测CHO残留的宿主细胞DNA,以及Certal Internal Control。该试剂盒还包含Certal Residual DNA Positive Control,用于存在CHO宿主细胞DNA信号时验证PCR分析的功能,以及2种不同浓度的ROX阴性对照染料,能够用于几乎所有的real-time仪器。
Certal Residual DNA Detection Kits能够灵敏、可靠的定量检测残留的基因组DNA(gDNA),这对生产安全和可靠的生物制品至关重要(参见" Highly sensitive and reliable detection")。检测残留的DNA需要最小限度的检测和高线性范围,以确保可靠的检测,即使残留的gDNA的水平很低(参见" Low limit of detection")。Certal Residual DNA Detection Kits与多种循环仪兼容,提供灵敏、可靠的数据(参见" Sensitive and reliable detection on a wide range of cyclers"和" Sensitive and reliable detection of CHO genomic DNA on the Rotor-Gene Q")。
为确保安全,Certal Residual DNA Detection Kits包含QIAGEN Internal Control,专门设计用于正确解读阴性结果且不干预目标分析。QIAGEN Internal Control与基因组DNA共扩增时能够可靠的检测到(参见" Reliable detection of the QIAGEN Internal Control")。
为了确保最终的治疗材料中无来自宿主细胞的污染物,该宿主细胞用于生产生物制品,Certal Residual DNA Detection Kits运行预订的分析特异性检测CHO宿主细胞DNA。Certal Residual DNA Assay由优化的引物对和一个用于可靠检测残留的CHO基因组DNA的FAM标记的水解探针组成。人类DNA和Certal Internal Control DNA不会干扰Certal Residual DNA Assay。
预混的Certal Internal Control Assay包括正向反向引物和用于检测Certal Internal Control DNA的MAX标记的水解探针。Certal Internal Control Assay已经过特殊优化,可防止Certal Residual DNA Assays的干扰。Certal Residual DNA Positive Control通过检测扩增反应本身的功能,能够正确解读阴性结果。
Certal ResDNA PCR Buffer已经过优化,用于灵敏、可靠的定量双重real-time PCR结果。预混液还包括dUTP,能够在开始PCR前用尿嘧啶正糖苷酶预处理,以确保污染的PCR产物不影响随后的PCR反应。
组分 | 特征 | 优势 |
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Certal Residual DNA Assays和DNA对照 | ||
50x Certal Residual DNA Assay | 预订的、经优化和验证的引物-探针组(FAM标记) | 可靠检测残留的CHO宿主细胞DNA |
Certal Residual DNA阳性对照 | 由Certal Residual DNA Assay扩增的阳性对照DNA | 在检测不到残留的宿主细胞DNA时,验证Certal Residual DNA Assay是正确工作的 |
50x Certal Internal Control Assay | 预订的、经优化和验证的引物-探针组(MAX标记)用于Certal Internal Control DNA检测 | 只特异性检测Certal Internal Control DNA。经优化防止Certal Residual DNA Assays的干扰 |
Certal Internal Control DNA | 由Certal Internal Control Assay扩增的Internal Control DNA | 排除PCR抑制剂存在或在纯化过程中控制纯化和扩增 |
Certal ResDNA PCR Master Mix | ||
HotStarTaq DNA Polymerase | 95°C条件下激活15 分钟 | 室温下设置qPCR反应 |
Certal ResDNA PCR Buffer | KCl和(NH4)2SO4的平衡组合 | 特异性引物退火,确保可靠的PCR结果 |
Synthetic Factor MP | 同一管中可靠的多重分析4个基因 | |
dNTP mix | 包括dUTP,部分取代dTTP和可选的UNG 处理 | 当反应使用尿嘧啶正糖苷酶(UNG)预处理时,有效去除PCR产物的遗留 |
外加组分 | ||
50x ROX Dye Solution | 含阴性对照染料的分离管,用于标准化在Applied Biosystems 7500 real-time PCR体系上的荧光信号。可选:可用于来自Agilent的Stratagene仪器 | 准确定量需ROX染料的循环。不干扰在任何real-time循环仪上的PCR |
50x High-ROX Dye Solution | 含阴性对照染料的分离管,用于标准化在Applied Biosystems 7900和StepOne real-time PCR体系上的荧光信号 | |
Uracil-N-Glycosylase (UNG) | 纯化的、无核酶的重组酶,在分离管中 | 有效去除PCR产物的遗留 |
QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer | 专有的缓冲配方,用于稀释和贮存核酸标准品 | 在稀释和反应建立过程中稳定RNA和DNA标准品,以及防止塑料表面核苷酸的损失,如管子和枪头 |
Certal Residual DNA Detection Kits提供简单的流程用于检测宿主细胞DNA,包含Certal Internal Control和Certal Residual DNA Positive Control(参见" Certal Residual DNA Detection Kit procedure")。只需简单的将预混液与Certal Residual DNA Assay、Certal Internal Control Assay和Certal Internal Control DNA混合,然后加入DNA样本或Certal Residual DNA Positive Control。该试剂盒的操作手册上有优化的方案,用于多种循环仪。ROX提供不同浓度的2管,用于多种real-time仪器(参见下表)。
ROX染料溶液 | |||
仪器 | 不需要 | ROX染料溶液 | 高浓度ROX染料溶液 |
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Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪 | X | ||
Rotor-Gene 6000和Rotor-Gene 3000 | X | ||
Applied Biosystems 7500和ABI ViiA7 | X | ||
Applied Biosystems 7900HT、StepOne and StepOne Plus、ABI PRISM 7700、7000和7300 | X | ||
Mx3000P、Mx3005P和Mx4000 | X | 可选 | |
iCycler iQ System | X | ||
LightCycler 480 | X |