蛋白质谱检测技术

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蛋白质谱检测技术简单来说就是一种将质谱仪用于研究蛋白质的技术。它的基本原理是蛋白质经过蛋白酶的酶切消化后成肽段混合物，在质谱仪中肽段混合物电离形成带电离子，质谱分析器将具有特定质量与电荷比值（即质荷比，M/Z）的肽段离子分离开来，经过检测器收集分离的离子，确定每个离子的M/Z值，从而得到对应的质谱图。通过和理论上蛋白质经过胰蛋白酶消化后产生的质谱图进行比对而鉴定蛋白质。

蛋白复合物鉴定：

蛋白复合物鉴定是通过质谱仪对蛋白复合物（通常是IP后的复合物或其他方式获得的蛋白混合物）进行定性的检测方法，其检测的样品可以是蛋白质溶液、蛋白质胶条或IP后未洗脱的beads等等。

项目优势：

1、通量高；

2、鉴定准确性高；

3、灵敏度高；

4、不依赖于抗体；

服务流程：

1、蛋白样品；

2、蛋白酶解；

3、质谱检测；

4、数据库检索

5、鉴定分析

目标蛋白翻译后修饰鉴定：

蛋白质氨基酸序列的特定位置可以与化学基团或者小分子量的蛋白共价结合从而发生蛋白质翻译后修饰(post-translational modifications，PTMs)，相较于没有发生修饰的蛋白，PTMs会导致特定序列分子量的增加。在蛋白翻译后修饰方式的鉴定过程中，蛋白会首先被酶切成肽段，然后进入质谱进行分析；通过质谱分析，得到的是一系列肽段的分子质量信息。对于某一个特定肽段而言，在没有发生任何翻译后修饰的情况下，其序列信息和分子量是确定的。当它发生了某种翻译后修饰之后，在质谱检测过程中会发现有对应修饰集团的分子量增加。

项目优势：

1、蛋白修饰位点覆盖率高；

2、适用于各种修饰类型鉴定；

3、不依赖于抗体；

4、一次可检测多种常见修饰；

服务流程：

1、目的蛋白胶条样品；

2、蛋白酶解；

3、质谱检测；

4、数据库检索；

5、修饰位点分析。

TMT/ITRAQ定量蛋白质组学检测

TRAQ（isobaric tags for relative and absolute quantitation，同位素标记相对与绝对定量技术）技术和TMT™（Tandem Mass Tag™）技术分别是由 AB Sciex公司和Thermo Scientific开发的体外标记技术，采用2-16同位素标签与氨基反应实现连接，在一级质谱中，不同来源的相同肽段被连接上总质量相同的完整标签试剂，具有相同质荷比，表现为一个峰。在二级质谱中，标签试剂在不同基团连接处发生断裂，试剂中报告基团表现信号，根据不同报告基团信号峰强弱进行肽段定量，并根据肽段二级质谱信息实现肽段定性，并最终回溯到蛋白水平。

iTRAQ/TMT原理示意图

项目优势：

1、通量高：能同时对2-16组样本中包含的蛋白进行定性及定量分析；

2、鉴定准确性高；

3、灵敏度高；

4、快速高效：液相色谱与串联质谱连用，自动化操作，分析速度快，分离效果好；

5、适用范围广：几乎可对任何物种的各类蛋白质进行分离鉴定；

服务流程：

1、蛋白样本制备；

2、酶解；

3、TMT或ITRAQ标记；

4、肽段混合分级；

5、质谱检测；

6、数据库检索；

7、数据分析；

SILAC定量蛋白质组学检测

SILAC是细胞培养条件下稳定同位素标记技术（Stable Isotope Labeling By Amino Acids In Cell Culture, SILAC）的简称。该技术利用含轻、中或重型同位素标记的必需氨基酸（主要是Lys和Arg）培养基培养细胞，通过5-7代培养，使得细胞中的蛋白质均被同位素标记，进而将不同处理的蛋白样品等量混合后，经过样品前处理及LC-MS/MS检测后即可得到有关蛋白的定量及定性结果。

SILAC原理示意图

项目优势：

1、通量高；

2、灵敏度高；

3、重复性好且定量准确：同位素标记效率高、稳定，不受裂解液影响，结果重复性好，可信度高；

4、体内标记，结果更接近真实生理状态

5、快速高效：液相色谱与串联质谱连用，自动化操作，分析速度快，分离效果好。

服务流程：

1、细胞培养；

2、蛋白提取；

3、酶切；

4、肽段分级；

5、质谱检测；

6、数据库检索；

7、数据分析；