REPLI-g WTA Single Cell Kit (24)

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  • 18240
  • 市场价:
  • 18240

  • 品牌:Qiagen/凯杰
  • 货号:150063
  • 规格:1kit
  • 计量单位:
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  • 辽宁省

    吉林省

    黑龙江省

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看了又看换一换

商品名称:REPLI-g WTA Single Cell Kit (24)

  • 货号:150063
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Features

  • 从单一细胞实现完整的转录本覆盖度
  • MDA技术可实现均一的WTA,序列偏差可以忽略不计
  • 针对新技术应用(包括NGS)优化
  • 总RNA或富集mRNA(ploy A +)RNA的扩增
  • 用于癌症和干细胞研究的新工具
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Product Details

REPLI-g WTA Single Cell Kit能够在单细胞转录本水平上对转录调控的影响进行可靠的研究,并允许从单细胞(1–1000个细胞)进行所有转录物的均一扩增。专用的缓冲液和试剂经过了独特的、可控的净化步骤以防止REPLI-g技术扩增污染的核酸。创新的裂解液可以有效地稳定细胞RNA,以确保所得到的RNA准确地反映体内基因的表达图谱。所有的酶促步骤已经过专门改进,使得用于cDNA准确扩增的RNA得到高效处理。而扩增步骤则采用创新的多重置换扩增(MDA)技术,序列偏差可以忽略不计。
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Performance

覆盖全转录组,实验可重复性高
REPLI-g WTA Single Cell Kit包含新颖的REPLI-g SensiPhi DNA聚合酶,以及从1–1000个细胞或等量的小量样本进行全转录本扩增(WTA)的优化缓冲液和试剂。高效裂解细胞、彻底清除基因组DNA(gDNA)和敏感的逆转录物之后,采用多重置换扩增(MDA)技术,以可以忽略的序列偏差对整个转录本均一地扩增cDNA(参见 Multiple Displacement Amplification (MDA) technology)。使用REPLI-g WTA Single Cell Kit扩增的cDNA,经证明在二代测序技术(NGS)和real-time PCR应用中具有各细胞间和各次实验间的高度可重复性(参见 High level of experimental reproducibility)。扩增的cDNA可以轻松地应用于各种下游应用(参见 REPLI-g amplified cDNA performs like gDNA in downstream experiments)。

蛋白编码RNA的数量多
扩增富集mRNA的RNA (poly A+)的能力,使REPLI-g WTA Single Cell Kit特别适用于通过NGS研究单细胞转录本水平上的转录调控影响。产生超过90%的NGS片段的核糖体RNA(rRNA)扩增几乎完全被消除,可产生有意义的mRNA-Seq数据。使用mRNA富集实验方法的WTA后,80%以上的读段可以用于定位蛋白编码RNA(参见 High number of mappable reads from just 3 cells)。

可靠检测低丰度转录本
单细胞分析的挑战性大,尤其是同一细胞内的转录本丰度差异很大时。为获得准确的结果,应确保全转录组扩增时可靠扩增所有转录本。REPLI-g WTA Single Cell Kit高度适合于但细胞中转录本分析,即便是低丰度转录本。对使用REPLI-g技术扩增的转录本abl-1进行real-time PCR分析,结果显示即便是低丰度转录本也能在使用该试剂盒扩增后,得以可靠的检测(参见 Reliable detection of even low-abundance transcripts from single cells)。

多种研究领域的应用
REPLI-g WTA Single Cell Kit可以从单细胞(如肿瘤细胞、干细胞或分选细胞)有效地扩增获得cDNA,并从纯化的总RNA或poly A+ RNA(10 pg–100 ng)生成和扩增cDNA,适合于广泛的研究领域(参见下表)。

样本类型和研究领域
样本材料(细胞/总RNA) 研究领域
人类/动物 生物标记物的研究(表达)
干细胞研究
游离胚胎细胞分析
嵌合体研究
遗传易感性研究
转基因动物基因分型
癌症
体细胞遗传变异分析
肿瘤恶化
肿瘤干细胞/演化
游离肿瘤细胞分析

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Principle

转录调节受到各种因素驱动,如应激、细胞环境或由疾病或体细胞基因组变异(例如,点突变、拷贝数变异或结构变化)等。此外,如可变剪接等转录后加工,导致转录模式不同并最终造成生理机能的不同。由于组织的复合结构,在单细胞中对转录调控进行研究,而不是分析大量的细胞并且立足分析结果解释他们的行为,正不断引起科学家们的兴趣。

REPLI-g WTA Single Cell Kit经过特别设计,能在单细胞转录水平上可靠地研究转录调节的影响。它可以对整个转录本进行高度均一的扩增,并且序列偏差可以忽略不计。REPLI‑g WTA Single Cell Kit提供的单细胞全转录本扩增是对全基因组扩增试剂(REPLI-g Single Cell Kit)的相应补充。本方法基于MDA技术,该技术利用能够复制可达70 kb而无需解离cDNA模板的一种独特的、连续性DNA聚合酶进行cDNA恒温扩增(参见 Multiple Displacement Amplification (MDA) technology)。
REPLI-g WTA Single Cell Kit独特的构成
  • 所有的试剂酶和扩增组分都经过了独特的、可控的净化步骤以确保消除被REPLI-g方法扩增的DNA或RNA污染。下面的步骤则是对试剂进行严格的质量控制,以确保其具有完整的功能。
  • 独特的裂解缓冲液可以有效地稳定细胞RNA和DNA。这确保了所产生的RNA能准确地反映体内基因表达图谱,以及RNA和DNA保持完整无缺,用于随后的基因组覆盖范围最大化分析。
  • 所有的酶促步骤已经过专门改进,使RNA或DNA的扩增准确而有效。例如,这些步骤包括在用于RNA扩增的cDNA合成之前有效的去除gDNA以及确保DNA有效扩增的酶解DNA制备。
  • 新颖的REPLI-g SensiPhi DNA Polymerase可以用于多重置换扩增(MDA)。它是新开发的高亲和力酶,可以更有效地结合DNA,特别是当DNA浓度在反应混合物中较低时。此外,对比基于PCR的方法,REPLI-g SensiPhi DNA Polymerase具有较强的校对活性,可以将错误减少1000倍。它还具有很强的链置换活性,通过稳定的发夹结构使DNA得以复制,该结构对以Taq酶为基础的全基因组和全转录扩增步骤具有抗性。
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销售区域
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