REPLI-g Mitochondrial DNA Kit (25)

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  • 品牌:Qiagen/凯杰
  • 货号:151023
  • 规格:1kit
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  • 辽宁省

    吉林省

    黑龙江省

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看了又看换一换

商品名称:REPLI-g Mitochondrial DNA Kit (25)

  • 货号:151023
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Features

  • 克服了分离线粒体DNA耗时的问题
  • 从总DNA中选择性扩增线粒体DNA
  • 扩增得到多达4 µg的高纯度线粒体DNA
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Product Details

REPLI-g Mitochondrial DNA Kit可从DNA样本中选择性扩增线粒体DNA,无需预先分离线粒体DNA。该试剂盒含有DNA聚合酶、缓冲液和试剂,可利用MDA技术从少量样本中的总DNA中特异性、均一的扩增人类线粒体DNA。这一简便的操作可富集线粒体DNA,且细胞核DNA污染最小,避免进行耗时的线粒体DNA分离纯化,提高了下游分析的灵敏度。

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Performance

总DNA中一般含有大约0.1%的线粒体DNA(如:1 ng人类总DNA含有1 pg线粒体DNA)。REPLI-g Mitochondrial DNA Kit可以特异性扩增人类线粒体全基因组,50 µl反应体系可扩增获得大约4 µg高纯度线粒体DNA。这相当于4000万倍的扩增效果,依据起始量会有所不同(参见" Enrichment of mitochondrial DNA")。产物的平均长度一般长于10 kb。
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Principle

常见的获得线粒体DNA的限制之一为需要将线粒体DNA与细胞核DNA分离,在需要提高线粒体DNA标记物分析的灵敏度时尤其如此。分离过程涉及很多耗时的步骤,有可能导致线粒体DNA的损失。REPLI-g Mitochondrial DNA Kit可在含有总DNA的样本中直接扩增获得线粒体DNA,解决了这一问题。

REPLI-g Mitochondrial DNA Kit可快速、高度均一的对线粒体基因组进行全基因组扩增。该方法基于MDA技术,采用新型独特进行性的DNA聚合酶进行等温基因组扩增。REPLI-g DNA Polymerase凭借其活跃的进行性置换反应,可扩增得到100 kb的DNA,无需预先分离DNA。与PCR扩增方法相比,这种方法能很大程度减小序列偏差和不均一位点的出现。

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Procedure

使用REPLI-g Mitochondrial DNA Kit扩增线粒体DNA涉及两个基本的步骤(参见" Purified mitochondrial DNA procedure")。首先,将含有总DNA的样本置于REPLI-g mt Reaction Buffer中75°C孵育五分钟,使其变性;通过冷却,使变性停止。然后,加入REPLI-g DNA Polymerase,在33°C开始恒温扩增8小时。
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Applications

REPLI-g技术扩增获得的线粒体DNA可用于多种下游应用,包括:

  • 基因分型(例如:SNP、缺失、插入)
  • 终点式PCR、real-time PCR 
  • 测序
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