商品名称:SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads)
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产品说明
SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003 是一套完整的 ChIP 试剂盒,包含进行多达 6 次染色质制备和 30 次染色质免疫沉淀分析所必需的缓冲液和试剂,优化后每次实验使用 4 X 106 个细胞。一次完整的检测可在短达两天内进行,并且使用更多或更少的细胞时可轻松扩增或缩减。
细胞用甲醛固定后裂解,染色质与 Micrococcal Nuclease 部分酶切形成片段,从而获得 1-5 个核小体的染色质片段。染色质的酶解较超声处理更为温和,可避免因超声处理期间不同的超声处理功率和染色质乳化而引发的问题,因为这些因素会因蛋白变性和降解而导致染色质碎裂不完全或抗体表位缺失。使用经 ChIP 验证的抗体和 ChIP-Grade Protein G Magnetic Beads 进行染色质免疫沉淀。在蛋白质-DNA 解交联后,DNA 使用 DNA 纯化离心柱进行纯化,以便简单快速地回收 DNA 并去除蛋白污染物,无需进行苯酚/氯仿提取和乙醇沉淀。免疫沉淀期间,特定 DNA 序列的富集可使用标准 PCR、定量实时 PCR、芯片 ChIP 扩增、测序或克隆技术等各种方法进行分析。该试剂盒可用于 ChIP-seq。
我们的所有 SimpleChIP®试剂盒还提供确保 ChIP 实验成功的重要对照物。该试剂盒包含对人和小鼠核糖体蛋白 L30 (RPL30) 基因进行 PCR 检测所需的阳性对照 Histone H3 Antibody、阴性对照 Normal Rabbit IgG Antibody 和引物组。组蛋白 H3 是染色质的一种核心组分,能在基因组内结合多数 DNA 序列,包括 RPL30 基因座。由于几乎所有被检测基因座上富含Histone H3,因此,Histone H3 Antibody 可用作通用阳性对照。
特异性/灵敏度
SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit 可与所有经 ChIP 验证的抗体一同用来检测哺乳动物细胞中内源水平的蛋白-DNA 相互作用以及组蛋白修饰(见图 1 至图 4)。阳性对照 Histone H3 Antibody 可识别许多不同物种中高度保守的组蛋白 H3,包括人、小鼠、大鼠和猴。用于人和小鼠阳性对照 RPL30 基因座的引物组也包括在内,但该试剂盒用于检测其他物种时需要设计额外的对照引物组。